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ELISA試劑盒的運輸工作

2017-02-13 [1130]

ELISA試劑盒的運輸工作
1.簡單,不需要復雜而昂貴的儀器(如電洗脫儀)。
2.適用于變性膠(SDS-PAGE)和非變性膠。
3.回收率一般在50-90%之間(跟蛋白質大小,洗脫時間相關)。
4.跟后續的實驗兼容,包括2-D電泳、質譜測序等。
運輸及保存    常溫運輸,4℃保存,有效期一年。
自備試劑      無
ELISA試劑盒使用方法      
1. 按常規方法進行變性(SDS-PAGE)或非變性蛋白電泳。
2. 切取含目的蛋白的膠(盡可能地把多余的膠切除,否則會影響回收效率)。注意:固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建議把樣品分多孔上樣,電泳后只切其中一個樣孔的膠條進行固定和染色,然后將此膠條放回到在整體膠中原來的位置,通過顯色膠條上的蛋白條帶找到在未染色膠上對應區域,并切下此區域的膠進行回收。
3.將切下的膠塊轉移到1.5 mL塑料離心管中。
4.用研磨杵充分將膠塊壓磨成盡可能細小的碎片。
5.加入200 uL溶液A,4℃搖晃洗脫至少2-16小時(夜)。此時將溶液B放在冰箱預冷。
6.10,000 g離心10分鐘,轉移上清到新的離心管中,注意不要吸取碎膠。
7.加入5倍體積的預冷的溶液B,搖晃混勻。
8.-20℃放置至少10-30分鐘。
9.室溫12,000 g離心5-20分鐘,棄上清。
10.
ELISA試劑盒室溫充分晾干,得到的沉淀即為回收的蛋白質。回收的蛋白質可溶解在適當的緩沖液中,可用于后續實驗(2-D電泳、質譜測序等)。

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