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簡單介紹細胞凍存的方法

2017-01-12 [1323]

?嗜多染紅細胞是分裂后期的紅細胞由幼年發展為成熟紅細胞的一個階段,此時紅細胞的主核已排出,因胞質內含有核糖體,Giemsa染色呈灰藍色,成熟紅細胞的核糖體已消失,被染成淡橘紅色。骨髓中嗜多染紅細胞數量充足,由于無核,極易觀察到微核,因此,骨髓中嗜多染紅細胞成為微核試驗的細胞群。
細胞實驗原理
   染色單體或染色體的無著絲點斷片,或因紡錘體受損而丟失的整個染色體,在細胞分裂后期,仍然在細胞質中。末期之后,單獨形成一個或幾個規則的次核,被包含在子細胞的胞質內,因比主核小,故稱為微核。大小應為主核的1/20~1/5。微核的折光率及細胞化學反應性質和主核一樣。微核率是和用藥的劑量或輻射累積效應呈正相關,所以可用簡易的、快速、靈敏的微核計數來代替繁雜的畸變染色體計數。Matter 和Schmid建立的微核測試是一種比較理想的方法,目前國內外已把微核測試用于輻射損傷、化學誘變劑、新藥試驗、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。
細胞凍存的方法:
1.細胞:選對數生長期細胞,收集細胞24小時前換液一次。 
2.計數:按常規方法把細胞制成細胞懸液,計數,令細胞密度達5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。 
3.凍存液:先用培養液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。 
4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細胞懸液。 
5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細檢查,定要封嚴,必要時可浸入藍色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細胞名稱,凍存日期,以便日后查找。

 

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